Определение 17-кетостероидов в моче

Орлов Е.Н.

На протяжении нескольких десятков лет для диагностики ряда патологий широко в клинической практике использовали определение 17-кетостероидов в моче, в том числе для корректировки дозирования дексаметазона при беременности самыми известными сторонниками этого подхода являлись проф. Персианинов Леонид Семенович, Седельникова Вера Михайловна. Бесчисленное множество врачей в нашей стране применяли эти рекомендации на практике и отмечали большую пользу для вынашивания беременности. Опубликованы многочисленные хорошо научно аргументированные статьи на эту тему.  Надо особо отметить, что наука и образование, это  одно из немногих, что отвечало мировому уровню в СССР, к сожалению это нельзя сказать о современной науке в наше стране. Так цитирование научных трудов в наше время даже в академической науке находится на уровне Албании, а о состоянии науки в медицине, и говорить нечего. Что же случилось вдруг! Выдающиеся современные медицинские умы провели  рандомизированные всеобъемлющие исследования, получили и опубликовали новые интересные результаты? Да ни чего этого нет вообще! Просто взяли и повесили ярлык, что это советский опыт, раз советский значит по современном «прогрессивным» понятиям очень плохой, да и все тут. Многие тысячи врачей, применявшие этот подход и лечившие своих пациентов в нашей стране, мягко говоря, оказались в неловком положении.  Можно подумать, что они ни чего не понимали, ни чего не ведали, а слепо просто верили, а эти современные «ученные» во всем взяли да разобрались. Так ли это на самом деле? Причина заключается в стремление, убрать дешевый, широко используемый анализ и, таким образом, очистить место для гораздо более дорогих, но совершенно бесполезных тестов.

Широко используется в клинической практике с 1935 года (77 лет) [1] и сейчас остается важным диагностическим тестом. Сам метод, основанный на реакция Циммермана была впервые опубликована в 1935 году и с тех пор широко используется в биоклиническом анализе для определения 17-кетостероидов. С тех пор самой методике, различным ее вариантам и клиническому применению посвящено бесчисленное множество статей [2]. Основное ее применение это оценка уровня андрогенов в  организма. До появления иммунных методов определения гормонов в крови долго оставался единственным возможным лабораторным способом диагностики гиперандрогении. Трудно оценить клиническую пользу, которую принес этот метод во всем мире. Для сотен тысяч людей применялась диагностика по уровню суточной экскреции  17-КС.  Широко используется в настоящее время, например, для мониторинга беременности, корректировки дозировок глюкортикоидов и контрацептивов.

После внедрения и широкого распространения автоматических анализаторов гормонов в крови, метод был без доказательно и научного экспериметального обоснования объявлен как устаревший, что полностью не соответствует действительности. Определение 17-КС в моче широко используется во всем мире с научной и диагностической целью, о чем свидетельствует около 30 тысяч ссылок на этот метод в поисковых системах Интернета. У нас в стране вдруг кто-то, без каких-либо доказательств и естественно без необходимых научных исследований взяли да и объявил метод якобы устаревшим. Причина заключается только в том, что методы диагностики стали устанавливать богатые производители медицинского оборудования заинтересованные в продвижение на рынок дорогих своих приборов и реагентов к ним. 17- КС является дешевым, простым химическим и надежным способом, прекрасно отработанным и хорошо зарекомендовавшим себя за 70 лет использования. Причем нельзя создать прибор, который будет автоматически выполнять это определение, так как процессы, где присутствует экстракция с трудом поддается автоматизации.

Определение гормонов в крови нашлись недостатки, это значительные вариации результатов анализа в зависимости от лаборатории, где гормоны определяются. Влияют биологические факторы (так суточные колебания тестостерона в процентах от средней составляет 30-50 процентов, а кортизола 180-200%) [6]. Последнее время, особенно отмечается, что  определение гормонов в крови не прямое, а опосредованное и основано на реакции антиген антитело, что вносит свои особенности. Погрешности могут достигать 60-80 процентов и возникают внутри внеаналитических сфер исследования. [6]

К преимуществам метода относится его неинвазивность, безопасность для персонала лаборатории. Профессор с мировым именем Сидельникова Вера Михайловна рекомендует корректировать дозировку дексаметазона при беременности по уровню экскреции 17-КС [7].

Определения 17-кетостероидов проводят двумя методами. Наиболее часто в настоящее время используют коммерческие колоночные тесты. Первые наборы появились в России производитель  - фирма  Bio-Rad теперь есть и российские. Особенностью колоночных тестов является приспособленность проведения определений в медицинских учреждениях. Гидролизат мочи пропускают через колонку наполненную сорбентом, промывают, а затем кетостероиды элюируют спиртом и определяют на фотометре. Достоинства метода - удобно проводить определения в клинической лаборатории. Недостаток это нестабильность окраски, что сказывается на точности получаемых данных.  

Открытые колонки для определения 17-КС.

Мы определяем 17-кетостероиды классическим химическим методом, который десятки лет применяли на практике. Метод хорошо испытан в клинической практике многих стран мира. Большое достоинства в том, что применяли  десятки лет для многих тысяч и тысяч пациентов. Именно так делали этот анализ для наших предков. Недостатком этого подхода является необходимость, химической специализации исполнителя, а для нас именно в этом и есть преимущество. Выполняют его не врачи с медицинским образованием, а профессиональные химики. Анализ, если кратко, заключается в гидролизе коньюгатов, экстракции эфиром, проведении реакции Циммермана с последующим фотометрированием.

В нашей лаборатории определение 17-КС осуществляется по классической унифицированной методике [3], а это очень важно! (В большинстве лабораторий используется метод определения в открытых колонках, с последующим фотометрированием хромогенов в спиртовом растворе щелочи, при этом окраска остается не стабильна и быстро ослабевает во времени, что сказывается не лучшим образом на результатах.)

Избыточное потребление жидкости и снижение функции почек может влиять на уровень 17-КС, так же как  и на уровень кортизола в моче [4],[5]

Таким образом, определение 17-КС в моче остается предпочтительным, наиболее опробированным на практике, надежным и неивазимным методом оценки целого ряда известных патологий.

            Сумма 17-КС представлена несколькими индивидуальными фракциями приблизительно 80% приходится на андростерон и этиохоланолон, причем андростерона содержится чуть больше чем этиохоланолона. Остальные фракции это 11-кето и 11-гидро андростерон и этиохоланолон, также дегидроэпиандростерон, содержание которого может колебаться, начиная от нескольких процентов до порядка 10%  в норме.

Грубейшей ошибкой, повторяемой в интернете, что 17-КС составляет в основном дегидроэпиандростерон. Но в действительности, в норме, содержание этого гормона в моче может и вообще не быть или очень мало.

            Приблизительно 80% процентов 17-КС синтезируются у женщин в надпочечниках, остальное количество в яичниках и в перефирических тканях.

Референсный интервал

Лекарственные препараты, которые могут завысить результаты определения 17-КС: Антибиотики, хлорамфеникол, аминазин, мепробамат, фенотиазины, хинидин, секобарбитал, спиронолактон.

Лекарственные препараты, которые могут уменьшить 17-КС: дексаметазон, противозачаточные таблетки, эстрогены, пробенецид, резерпин, салицилаты (длительное применение), тиазидные диуретики,

Рис. 1. Большая часть фракций 17-кетостероидов это результат катаболизма тестостерона. Тестостерон выводится с мочей в виде андростерона и этиохоланолона.

Литература.

1. Zimmerman W.Z. Physiol.Chem., 1935, V. 233,p. 257.

J Gynecol Obstet Biol Reprod (Paris). 1981;10(2):163-9.

Colette C, Maillet R, Gautier C, Agnani G, Guinchard B.

The treatment of certain cases of sterility of infertility associated with an abnormal rise in urinary 17-ketosteroids by using cortisone derivatives.

Изучены 45 женщин страдающих первичным или вторичным бесплодием. Единственное выявленное нарушение это повышение экскреции 17-кетостероидов выше 35 мкмоль/сутки. Лечение проводили лечение глюкортикоидами.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММАРНЫХ 17-КЕТОСТЕРОИДОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

ОРЛОВ Е.Н., ПОДТЕТЕНЕВ А.Д., АНТИПОВ Е.М., МАКАРОВ О.В., НИКОЛАЕВ Н.Н., БРАТЧИКОВА Т.В.

 Тип: патент на изобретение Номер: 2190853 Страна: 

 Год: 2002 Дата регистрации: 11.11.1998

Адрес:  117997, Москва, ул. Островитянова, 1, Российский государственный медицинский университет, патентный отдел, С.В.Пыжеву

 МПК: 7G 01N 33/74 A

METHOD FOR DETECTING TOTAL 17- KETOSTEROIDS IN BIOLOGICAL LIQUIDS

Orlov E.N., Podtetenev A.D., Antipov E.M., Makarov O.V., Nikolaev N.N., Bratchikova T.V